Antioksidan merupakan zat yang dapat melindungi dari radikal bebas. Antioksidan digunakan sebagai bahan aktif untuk melindungi kulit dari kerusakan oksidatif dan menunda tanda-tanda penuaan dini. Jeruk lemon merupakan sumber antioksidan di alam. Niacinamide merupakan zat yang memiliki kemampuan dalam melindungi kulit dari dampak buruk radikal bebas, sinar ultraviolet, dan polusi udara. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui aktivitas antioksidan pada sediaan serum kombinasi air perasan buah jeruk lemon dan niacinamide menggunakan metode DPPH (1,1-difenil-2-pikrilhidrazin) menggunakan spektrofotometri UV-Vis, analisis data yang dilakukan yaitu dengan menggunakan statistik uji One Way Anova. Hasil penelitian uji evaluasi menunjukkan sediaan serum telah memenuhi persyaratan. Formulasi yang memiliki aktivitas antioksidan paling tinggi dari ketiga formulasi tersebut yaitu pada formulasi 3 (air perasan buah jeruk lemon 0 : niacinamide 5) dengan nilai rata-rata 21,49 ppm yang berarti sediaan tersebut tergolong sebagai antioksidan sangat kuat karena memiliki nilai < 50 ppm