Kasus efusi pleura di Indonesia disebabkan oleh infeksi tuberkulosis dan tumor paru. Untuk mengetahui penyebab efusi pleura dapat dilakukan pemeriksaan sitologi. Diagnosis sitologi dengan benar memerlukan salah satu syarat yaitu fiksasi sitologi dengan sempurna. Faktor-faktor yang mempengaruhi fiksasi salah satunya yaitu durasi waktu. Fiksasi dengan alkohol 96% selama 30 menit merupakan waktu standar untuk spesimen sitologi. Fiksasi dapat dilakukan selama 15 menit sebagai waktu alternatif untuk penyerapan dan mengawetkan apusan sitologi. Tujuan: untuk mengetahui gambaran sitologi efusi pleura dengan variasi waktu fiksasi alkohol 96% selama 15 menit dan 30 menit menggunakan pewarnaan Papanicolaou. Metode penelitian ini yaitu eksperimental menggunakan 16 sampel cairan pleura dengan 2 kelompok yaitu, kelompok perlakuan yang difiksasi selama 15 menit (A) dan kelompok kontrol yang difiksasi selama 30 menit (B). Hasil: kualitas sediaan pada kelompok A dikategorikan tidak baik dan pada kelompok B dikategorikan baik. Simpulan: fiksasi alkohol 96% selama 30 menit menggunakan pewarnaan Papanicolaou pada cairan pleura berdasarkan hasil penilaian kualitas sediaan menunjukkan kualitas yang baik.